Ir gandrīz visi uzņēmumi, kas pārdevabromelīna fermentu pulverisir sajaukts ar papaīnu.Bromelīnu ir grūti attīrīt līdz 5000GDU/g. bet ir ļoti viegli attīrīt papaīnu līdz 1000,000 GDU/g. pat līdz 2000 000 GDU/g. bet bromelīna funkcijas atšķiras no papaīna. krāsa, smarža, šķīdība ūdenī un garša kontrastē ar viltotu produktu un īstu produktu. Tie atšķiras ar to, ka pareizais bromelīna enzīma pulveris ir pelēks, bez smaržas, bez garšas un ūdenī nešķīstošs.
Bet viltus bromelainam ir šādas īpašības:
● Tas ir gaiši dzeltens, aromātisks un maigi salds un šķīst ūdenī. Tā ir papaīna īpašība.
● To lieto iekaisuma mazināšanai un sāpju mazināšanai. bet papain šo funkciju gandrīz nav.
● To lieto tikai kā uztura bagātinātāju, nevis pārtikas piedevu, bet patiešām var būt farmaceitiska. Bet papaīnu izmanto tikai kā gaļas mīkstinātāja pulveri un kosmētiku.
Mēs pārbaudījām bromelīnu pēc SDS-PAGE gēla un ŽELATĪNA GREMŠANAS VIENĪBAS ANALĪTISKĀS un HPLC metodēm, viltotajam produktam SDS-PAGE gēla metodē ir mazāk mērķa molekulu.
Tālāk ir sniegti SDS lapas elektroforēzes rezultāti
Iepriekš redzamais plankums parāda, ka tikai pareizajam produktam ir tāds pats plankums attēla pareizajā vietā, bet viltotajam produktam ir maz plankumu, kas nozīmē, ka molekulmasa ir tikko redzama.
Bromelīna molekulmasa ir aptuveni 33000, bet papaīna molekulmasa ir 21000. Un HPLC hromatogramma:
Jūs redzēsit, ka tikai pareizais ekstrakts satur pareizo bromelīna molekulmasu un ir nosakāms ar HPLC.
Bet, ja mēs pārbaudījām tikai ar želatīna sagremošanas vienības analītisko metodi (GDU), skatiet II pielikumu. Gan pareizajam, gan viltotajam produktam ir tādi paši rezultāti, kā norādīts tālāk:
Ananāsa kāts ir ļoti lēts, un ātrums no kāta līdz bromelainam ir ļoti zems, ražošanas procesā ir zināms piesārņojums.
Gandrīz visa bromelīna fermentu pulvera rūpnīca atrodas netālu no lauka. Viņi izmanto svaigu kātu. Nav iespējams nosūtīt kātu lielos attālumos. Izejmateriāls ir jāapstrādā pēc iespējas ātrāk, kad tas tiek savākts no lauka, vai arī tas jāuzglabā zemā temperatūrā (4-8 grādi), lai izvairītos no olbaltumvielu sadalīšanās. Reālajā dzīvē ražotājs faktiski nevar izpildīt nevienu no diviem iepriekš minētajiem nosacījumiem, jo ananāsiem ir pārāk daudz stublāju. Saprātīga metode ir līdzsvars starp apstrādes laiku un olbaltumvielu aktivitātes zudumu. Parasti neapstrādātas izejvielas tiek ražotas ananāsu ražas sezonā, un neapstrādātas izejvielas tiek uzglabātas zemas temperatūras vidē (4-8 grādi).
Mēs veicam dažus testus par SDS lapas elektroforēzi. Teorētiski mēs varam to palielināt līdz 10,000 vai 20,000. bet tas būs ļoti dārgi. 5000GDU/g un padariet to stabilu, iespējams, uz malto atbalsta/mikrokapsulēta viena vai kaut kā, plus organiskās kvalitātes ekstrakcija/attīrīšana.
I pielikums
● 5. metode SDS poliakrilamīda gēla elektroforēze (SDS-PAGE)
SDS-PAGE ir denaturēta poliakrilamīda gēla elektroforēzes metode. Šīs metodes olbaltumvielu atdalīšanas princips ir balstīts uz faktu, ka lielākā daļa olbaltumvielu var apvienoties ar anjonu virsmaktīvo vielu nātrija dodecilsulfātu (SDS) svara attiecībā, veidojot kompleksu.
Olbaltumvielu molekulu negatīvais lādiņš ievērojami pārsniedz dabisko olbaltumvielu molekulu neto lādiņu, novēršot dažādu olbaltumvielu molekulu lādiņu efektu un atdalot olbaltumvielas atbilstoši to molekulārajam izmēram.
Šo metodi izmanto proteīnu kvalitatīvai identifikācijai, tīrības un piemaisījumu kontrolei un kvantitatīvai noteikšanai.
1 Instrumenta ierīce
Pastāvīga sprieguma vai pastāvīgas strāvas barošanas avots, vertikāla plākšņu elektroforēzes tvertne un līmes veidošanas veidne.
2. Reaģenti
(1) Ūdens.
(2) Atdalīšanas gēla buferšķīdums (4x, A šķīdums) 1,5 mol/L trihidroksimetilaminometāna sālsskābes buferšķīdums. Nosver 18,15 g trihidroksimetilaminometāna un izšķīdina to atbilstošā daudzumā ūdens. Noregulējiet pH vērtību līdz 88 ar sālsskābi un atšķaidiet ar ūdeni līdz 100 ml.
(3) Nosver 58.0g akrilamīda un 20 g N,N'-metilēn-bisakrilamīda 30 procentu akrilamīda šķīdumā (B šķīdums), izšķīdina siltā ūdenī un atšķaida līdz 200 ml, filtrē ar filtrpapīru (uzglabā tumšs).
(4) Nosver 10 g nātrija dodecilsulfāta 10 procentu SDS šķīdumā (C šķīdums), izšķīdina ūdenī un atšķaida līdz 100 ml.
(5) Tetrametiletilēndiamīna šķīduma (TEMED, D šķīdums) komercializācijas reaģents.
10 procentu amonija persulfāta šķīdums (E šķīdums) Nosver 10 g amonija persulfāta, izšķīdina ūdenī un atšķaida līdz 100 ml. Ieteicams to sagatavot pirms lietošanas vai uzglabāt atsevišķi -20 grādu temperatūrā 2 nedēļas.
(7) Koncentrēts gumijas buferšķīdums (4 ×, F šķīdums) 0,5 mol/L trihidroksimetilaminometāns Sālsskābes buferšķīdums, nosver 6,05 g trihidroksimetilaminometāna, pievieno atbilstošu daudzumu ūdens, lai izšķīdinātu, noregulē pH vērtību līdz 6,8 ar sālsskābi. skābi un atšķaida ar ūdeni līdz 100 ml.
(8) Elektrodu buferšķīdums (10 ×) Nosver 30 g trimetilaminometāna, 144 g glicīna un 10 g nātrija dodecilsulfāta, izšķīdina tos ūdenī un atšķaida līdz aptuveni 800 ml. Noregulējiet pH vērtību uz 8.1-8.8 ar sālsskābi un atšķaidiet ar ūdeni līdz 1000 ml.
(9) Nereducēts parauga buferšķīdums (4 ×) Nosver 303 g trimetilaminometāna, 20 mg bromfenolzilā un 8,0 g nātrija dodecilsulfāta, izmēra 40 ml glicerīna, izšķīdina ūdenī un atšķaida līdz aptuveni 80 ml. Noregulējiet pH līdz 68 ar sālsskābi un atšķaidiet ar ūdeni līdz 100 ml.
(8) Elektrodu buferšķīdums (10 ×) Nosver 30 g trimetilaminometāna, 144 g glicīna un 10 g nātrija dodecilsulfāta, izšķīdina ūdenī un atšķaida līdz aptuveni 800 ml. Noregulējiet DH vērtību uz 81-88 ar sālsskābi un atšķaidiet ar ūdeni līdz 1000 ml
(9) Nereducēts parauga buferšķīdums (4 ×) Nosver 3,03 g trimetilaminometāna, 20 mg bromfenolzilā un 80 g nātrija dodecilsulfāta, izmēra 40 ml glicerīna, izšķīdina ūdenī un atšķaida līdz aptuveni 80 ml. Noregulējiet pH līdz 6,8 ar sālsskābi un atšķaidiet ar ūdeni līdz 100 ml.
(10) Samazināts testējamās vielas buferšķīdums (4 ×) Nosver 3,03 g trimetilaminometāna, 20 mg bromfenolzilā un 80 g nātrija dodecilsulfāta, izmēra 40 ml glicerīna, izšķīdina un atšķaida ar ūdeni līdz apmēram 80 ml un pievieno - 20ml merkaptoetanola, noregulējiet pH līdz 6,8 ar sālsskābi, atšķaidiet ar ūdeni līdz 100 ml (vai 3,03 g trimetilaminometāna, 20 mg bromfenolzilā, 8,0 g nātrija dodecilsulfāta, izmēriet 40 ml glicerīna, izšķīdiniet ūdenī un atšķaidiet līdz 80 ml, noregulējiet pH līdz 6,8 ar sālsskābi, atšķaidiet ar ūdeni līdz 100 ml un pirms lietošanas pievienojiet ditiotreitolu līdz 100 mmol/L).
● II pielikums
Želatīna sagremošanas vienības analītiskā metode (GDU)
A. Mērķis. Šo procedūru izmanto, lai noteiktu bromelīna enzīma pulvera proteolītisko aktivitāti.
B. Aprīkojums:
1. pH mērītājs
2. Pastāvīgas temperatūras ūdens vanna 45.0 grādi ± 0,1 grāds
3. Analītiskais līdzsvars
4. Mērkolbas
5. Tilpuma pipetes
6. Taimeris
7. Digitālā birete (precizitāte 0,1 ml)
8. Dūmu nosūcējs
9. Automātiskās pipetes
C. Drošības pasākumi:
Šis tests jāveic velkmes pārsegā.
1. Izmantojiet standarta laboratorijas drošības praksi.
2. Formaldehīds: visu laiku sagatavojiet un glabājiet velkmes pārsegā. Zināms kancerogēns un teratogēns.
3. Peroksīds: spēcīgs oksidētājs
D. Reaģenti un reaģentu preparāti:
1. Destilēts ūdens: aptuveni 500 ml: noregulējiet līdz pH 4,5 ar 0,1 N HCl.
2. Želatīna substrāts:
a. 25 gramus želatīna (Mikrobiologie. 1.04070) izšķīdina 375 ml karsta ūdens, uzvāra. Atdzesē līdz 45 grādiem.
b. Noregulējiet pH līdz 4,5 ar 0,1 N HCl un atšķaidiet līdz 500 ml destilēta ūdens ar pH 4,5.
c. Glabājiet želatīna substrātu 45 grādu temperatūrā.
3. Buferšķīdums:
a. Lēnām pievienojiet 15 g NaCl 40-50 ml ūdens 150 ml vārglāzē un samaisiet, lai izšķīdinātu.
b. Pievienojiet 0,570 ml etiķskābes.
c. Noregulējiet pH līdz 4,5 ar 0,2N HCl (tilpums būs lielāks par 100 ml.)
4. 3 procenti ūdeņraža peroksīds:
a. Ar pipeti ievadiet 2,5 ml 30 procentu ūdeņraža peroksīda (pamatšķīduma) 25 ml mērkolbā un atšķaida līdz tilpumam ar destilētu ūdeni pH 4,5
5. 37 procenti formaldehīda pH 9.0: a. Noregulējiet pietiekamu daudzumu (100 ml) formaldehīda līdz pH 9,0 ar 0,1 N NaOH (apmēram 20 ml formaldehīda katrā paraugā pirms pH regulēšanas).
Želatīna sagremošanas vienības analītiskā metode (GDU) - turpinājums.
6. 0.100 N NaOH: (iegādāts standartizēts) a. Izejas šķīdums: standartizēts pie 0,100 N
E. Procedūra:
1. Enzīmu sagatavošana:
a. Fermentu preparāta aprēķināšana
Svars {{0}}/mērķa aktivitāte (aptuveni 0,05 g vai 50 mg)
A. Precīzi iesveriet fermentu 50 ml mērkolbā
B. Pievieno 8,3 ml buferšķīduma.
b. Ļaujiet nostāvēties 30 minūtes istabas temperatūrā.
C. Atšķaida līdz 50 ml, izmantojot destilētu ūdeni ar pH 4,5, pievieno nelielu maisīšanas stieni un maisa vēl 10 līdz 15 minūtes.
2. Enzīmu procedūra:
a. Ar pipeti iepiliniet 25 ml želatīna substrāta katrā no divām 100 ml vārglāzēm, kurās ir maisīšanas stieņi, un novietojiet tās ūdens vannā 45 grādu temperatūrā uz 5 minūtēm, vienu testa šķīdumam un otru tukšajam šķīdumam.
b. Testa risinājums:
1) Pievienojiet 1.0 ml bromelīna enzīma pulvera šķīduma vārglāzē, kas paredzēta testa šķīdumam, sāciet iestatīt laiku un virpiniet.
2) Pēc tieši 20 minūšu ilgas inkubācijas 45 grādu temperatūrā pievienojiet 0,1 ml 3% ūdeņraža peroksīda un pavirpiniet.
3) Inkubējiet vēl 5 minūtes.
4) Izņemiet vārglāzi no ūdens vannas un, nepārtraukti maisot, ievietojiet pH zondi.
5) Reģistrējiet pH pēc 10 sekundēm (sākotnējais pH)
6) Noregulējiet līdz pH 6.0 ar 0,1 N NaOH. (Aptuveni 2-4 ml)
*Piezīme: pielāgojot pH uz 6.{1}} esiet piesardzīgs pie pH 5,8; pH palielinās lēni, un nelielas NaOH pievienošanas šajā brīdī ievērojami paaugstinās pH.
7) Nepārtraukti maisot, pievienojiet 10 ml 37 procentu formaldehīda pH 9,0.
8) Pierakstiet pH pēc 10 sekundēm un 1 minūtes.
9) Titrē līdz pH 9.0 ar 0,1 N NaOH.
10) Reģistrējiet titrēšanas tilpumu.
Šis ir testa titrs, T. c.
Tukšais risinājums: Tukšais risinājums ir jāpalaiž vienlaikus ar testa risinājumu. To panāk, uzsākot tukšā šķīduma noteikšanu 12 minūtes pēc testa šķīduma palaišanas. Tas dod jums laiku, lai pabeigtu testa šķīduma pārbaudi, pirms turpināt ar tukšo šķīdumu. 1) Pievienojiet 0,1 ml 3 procentu ūdeņraža peroksīda vārglāzē, kas paredzēta tukšajam šķīdumam, un pavirpiniet.
2) Pēc tieši 20 minūšu ilgas inkubācijas 45 grādu temperatūrā pievienojiet 1,0 ml bromelīna šķīduma un pavirpiniet.
3) Inkubējiet vēl 5 minūtes.
ŽELATĪNA SAGREMŠANAS VIENĪBAS ANALĪTISKĀ METODE (GDU) - turp.
4) Izņemiet vārglāzi no ūdens vannas un, nepārtraukti maisot, ievietojiet pH zondi.
5) Reģistrējiet pH pēc 10 sekundēm (sākotnējais pH)
6) Noregulējiet līdz pH 6.0 ar 0,1 N NaOH. (Aptuveni 2-4 ml)*Skatiet piezīmi iepriekš.
7) Nepārtraukti maisot, pievienojiet 10 ml 37 procentu formaldehīda pH 9,0.
8) Pierakstiet pH pēc 10 sekundēm un 1 minūtes.
9) Titrē līdz pH 9.0 ar 0,1 N NaOH.
10) Reģistrējiet titrēšanas tilpumu. Šis ir tukšais titrs, B.
F. Aprēķins:
1. Definīcija. Viena želatīna sagremošanas vienība ir tāds fermenta daudzums, kas pēc 20 minūšu fermentācijas 45 grādu temperatūrā atbrīvos 1 mg aminoslāpekļa no standarta želatīna šķīduma pie pH 4,5 vai pH 5,5 (GDU pH 4,5 vai pH 5,5).
GDU/g {0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Kur: T=Testa titrs (ml 0.1 N NaOH) B=Tukšais titrs (ml 0,1 N NaOH) N=Standartizētā NaOH norma (ti, 0,100) Wt (g)=Sākotnējais fermenta svars
G. Testēšanas parametri:
1. Fermentu preparātus atšķaida līdz aptuveni 0,001 g/ml (1 mg/ml) vai bromelīna enzīmu pulvera koncentrāta koncentrācijai aptuveni 1-2 GDU/ml. References materiāls tiek pārbaudīts katrā palaišanas reizē, lai nodrošinātu metodes precizitāti.
Guanjie nodrošina lielapjoma bromelīna pulveri, izmantojot GDU testa metodi. Mūsu ražošanas process darbojas CGMP standarta darbnīcās, izmantojot trīs ražošanas līnijas divās rūpnīcās un divas neatkarīgas laboratorijas. Ja jums ir kādi jautājumi par mūsu produktiem, lūdzu, sazinieties ar mums pa telinfo@gybiotech.com.
