Bromelīna enzīmu pulveris

● Mēs izmantojam labākās izejvielas.

Želatīns GremošanaSigestion Vienība Analītisks Metode (GDU)

A. Mērķis:

Šo procedūru izmanto, lai noteiktu proteolītisko aktivitātiBromelīna enzīmu pulveris.

B. Aprīkojums:

1. pH mērītājs

2. Pastāvīgas temperatūras ūdens vanna 45,0 grādi ± 0,1 grāds

3. Analītiskais līdzsvars

4. Mērkolbas

5. Tilpuma pipetes

6. Taimeris

7. Ciparu birete (0,1 ml precizitāte)

8. Dūmu nosūcējs

9. Automātiskās pipetes

C. Drošība Piesardzības pasākumi: Šis pārbaudi obligāti būt veikta iekšā uz dūmi kapuci.

1. Izmantojiet standarta laboratorijas drošības praksi.

2. Formaldehīds: visu laiku sagatavojiet un glabājiet velkmes pārsegā. Zināms kancerogēns un teratogēns.

3. Peroksīds: spēcīgs oksidētājs

D. Reaģenti un Reaģents preparāti:

1. Destilēts ūdens: aptuveni 500 ml: noregulējiet līdz pH 4,5 ar 0,1 N HCl.

2. Želatīns substrāts:

a. Izšķīdiniet 25 gramus želatīna (Mikrobiologie. 1.04070) 375 ml karsta ūdens, uzkarsē līdz vārīšanās temperatūrai. Atdzesē līdz 45 grādiem.

b. Noregulē pH līdz 4,5 ar 0,1 N HCl un atšķaida līdz 500 ml destilēta ūdens ar pH 4,5.

c. Glabājiet želatīna substrātu 45 grādu temperatūrā.

3. Buferis Risinājums:

a. Lēnām pievienojiet 15 g NaCl 40-50 ml ūdens 150 ml vārglāzē un samaisiet, lai izšķīdinātu.

b. Pievieno 0,570 ml etiķskābes.

c. Noregulējiet pH līdz 4,5 ar 0,2 N HCl (tilpums būs lielāks par 100 ml).

4. 3 % Ūdeņradis peroksīds:

a. Ar pipeti iepiliniet 2,5 ml 30% ūdeņraža peroksīda (nosacījuma šķīduma) 25 ml tilpuma mērinstrumentā

kolbu un atšķaida līdz tilpumam ar destilētu ūdeni pH 4,5

5. 37 % Formaldehīds pH 9.0:

a. Noregulējiet pietiekamu daudzumu (100 ml) formaldehīda līdz pH 9,0 ar 0,1 N NaOH (apmēram 20 ml)bromelīna fermentu pulverisformaldehīda daudzumu katrā paraugā pirms pH regulēšanas.)

6. 0.100 N NaOH: (Iegādāts standartizēts)

a. Izejas šķīdums: standartizēts pie 0,100 N

E. Procedūra:

1. Enzīmu sagatavošana:

a. Fermentu preparāta aprēķināšana

Svars=100/mērķa aktivitāte (aptuveni 0,05 g vai 50 mg)

A. Precīzi iesveriet fermentu 50 ml mērkolbā

B. Pievienojiet 8,3 ml buferšķīduma.

b. Ļaujiet nostāvēties 30 minūtes istabas temperatūrā.

c. Atšķaida līdz 50 ml, izmantojot destilētu ūdeni ar pH 4,5, pievieno nelielu maisīšanas stieni un maisa

papildu 10 līdz 15 minūtes

2. Enzīmu procedūra:

a. Ievietojiet 25 ml želatīna substrāta katrā no divām 100 ml vārglāzēm, kurās ir maisīšanas stieņi, un ievietojiet tos ūdens vannā 45 grādu temperatūrā uz 5 minūtēm, vienu testa šķīdumam un otru tukšajam šķīdumam.

b. Testa risinājums:

1) Pievienojiet 1,0 mlBromelīna enzīmu pulverisšķīdumu vārglāzē, kas paredzēta testa šķīdumam, sāciet noteikt laiku un virpuļot.

2) Pēc tieši 20 minūšu ilgas inkubācijas 45 grādu temperatūrā pievienojiet 0,1 ml 3% ūdeņraža peroksīda un samaisiet.

3) Inkubējiet vēl 5 minūtes.

4) Izņemiet vārglāzi no ūdens vannas un, nepārtraukti maisot, ievietojiet pH zondi.

5) Pierakstiet pH pēc 10 sekundēm (sākotnējais pH)

6) Noregulējiet līdz pH 6,0 ar 0,1 N NaOH. (Apmēram 2-4 ml)

*Piezīme: regulējot pH uz 6,0, esiet piesardzīgs pie pH 5,8; pH palielinās lēni, un nelielas NaOH pievienošanas šajā brīdī ievērojami paaugstinās pH.

7) Nepārtraukti maisot, pievieno 10 ml 37 % formaldehīda pH 9,0.

8) Pierakstiet pH pēc 10 sekundēm un 1 minūtes.

9) Titrē līdz pH 9,0 ar 0,1 N NaOH.

10) Reģistrējiet titrēšanas tilpumu. Šis ir testa titrs, T.

c. Tukšs risinājums:

Tukšais risinājums ir jāpalaiž vienlaikus ar testa risinājumu. To panāk, uzsākot tukšā šķīduma noteikšanu 12 minūtes pēc testa šķīduma palaišanas. Tas dod jums laiku, lai pabeigtu testa šķīduma pārbaudi, pirms turpināt ar tukšo šķīdumu.

1) Vārglāzē, kas paredzēta tukšajam šķīdumam, pievieno 0,1 ml 3 % ūdeņraža peroksīda un pavirpini.

2) Pēc tieši 20 minūšu inkubācijas 45 grādu temperatūrā pievienojiet 1,0 mlbromelīna fermentu pulverisrisinājums un virpulis.

3) Inkubējiet vēl 5 minūtes.